प्रतिरक्षा लेबलिंग के माध्यम से ऊतक संरचनाओं, एंटीबॉडी और रोगजनकों के साक्ष्य लोकप्रिय, आधुनिक और सटीक हैं। इम्युनोफ्लोरेसेंस तैयार, फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी के साथ प्रतिरक्षा लेबलिंग को संदर्भित करता है जो यूवी प्रकाश के तहत चमक के लिए बनाया जाता है।
पर प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस का पता लगाना सब्सट्रेट को सीधे चमकदार एंटीबॉडी के साथ प्राथमिक एंटीबॉडी या कृत्रिम एंटीजन के बिना जांच की जाती है।
प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस का पता लगाना क्या है?
डायरेक्ट इम्यूनोफ्लोरेसेंस डिटेक्शन इम्यूनोलॉजी, इम्यूनोस्टेस्टिंग और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के ज्ञान पर आधारित एक नैदानिक पद्धति है। यहाँ ध्यान केंद्रित एंटीबॉडी के ऊतक में विशिष्ट बिंदुओं या एक सीरम में प्रतिजनों को बांधने की क्षमता पर है। ये जगहें एपिटोप हैं।
जैव रासायनिक निदान में, कृत्रिम एंटीबॉडी या मिमिटिक्स (एकवचन: नकल) होते हैं जो इन एंटीबॉडी-एंटीजन बांडों को प्रतिदीप्ति या रेडियोधर्मिता द्वारा चिह्नित करने में सक्षम बनाते हैं। कृत्रिम एंटीबॉडी संयुग्मित करता है एक तरफ एपिटोप्स को बांधता है और दूसरी तरफ इम्यूनोफ्लोरेसेंस के मामले में एक फ्लोरोसेंट मार्कर होता है। यह रेडियोधर्मी मार्कर का उपयोग करने का एक विकल्प है। अप्रत्यक्ष पहचान की तुलना में इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रत्यक्ष पहचान के बारे में विशेष बात यह है कि जांच की गई सामग्री में एंटीजन के एपिथोप को बांधने वाला एंटीबॉडी भी फ्लोरोसेंट मार्कर के साथ एंटीबॉडी संयुग्म का प्रतिनिधित्व करता है। प्रत्यक्ष पहचान के लिए अतिरिक्त एंटीबॉडी आवश्यक नहीं हैं।
फ्लोरेसेंसिन, जो यूवी प्रकाश के नीचे चमकता है, और इम्यूनोफ्लोरेसेंस में कृत्रिम एंटीबॉडी संयुग्म बनाने के लिए फ्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट (एफआईटीसी) का उपयोग रंजक के रूप में किया जाता है। अब तक यह थोड़ा जटिल है, लेकिन प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस का पता लगाना विभिन्न प्रकार के चिकित्सा प्रश्नों के लिए मानक चिकित्सा प्रयोगशाला निदान पद्धति है। फ्लोरोसेंट डाई वाले एंटीबॉडी बिक्री के लिए तैयार हैं।
कार्य, प्रभाव और लक्ष्य
ऊतक में कुछ संरचनाओं को धुंधला करने के लिए टिशू परीक्षाओं के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस डायरेक्ट डिटेक्शन उपलब्ध है। लेकिन वे एकल कोशिकाओं के लिए भी उपलब्ध हैं। फ्लो साइटोमेट्री यहाँ एक प्रमुख भूमिका निभाता है। अंत में, ठोस और तरल चरण इम्यूनोसे होते हैं। ऊतकों के इम्युनोफ्लोरेसेंस परीक्षाएं ऑन्कोलॉजी में विशेष रूप से महत्वपूर्ण हैं, अर्थात् कैंसर रोगों का चिकित्सा उपचार।
ट्यूमर के ऊतकों में ट्यूमर-विशिष्ट एंटीजन को इम्युनोफ्लोरेसेंस के साथ सीधे पता लगाया जा सकता है। ट्यूमर से ऊतक के नमूनों पर ये परीक्षाएं अक्सर यह पता लगाने के लिए महत्वपूर्ण होती हैं कि शरीर में मौजूदा मेटास्टेस कहां से आए हैं, या यह तय करने के लिए कि ट्यूमर सौम्य या घातक है या नहीं। डायरेक्ट इम्यूनोफ्लोरेसेंस डिटेक्शन वाली व्यक्तिगत कोशिकाओं की जांच का उपयोग वायरस एंटीजन, बैक्टीरियल एंटीजन और अन्य एपिटोप्स को खोजने के लिए किया जाता है।
उदाहरण के लिए, आप यह पता लगा सकते हैं कि कोशिकाएं वायरस से संक्रमित हैं या कोशिकाओं के संक्रमण के किस चरण में हैं। FACS (= प्रतिदीप्ति-सक्रिय सेल सॉर्टिंग) नाम एक अत्यधिक कुशल प्रवाह साइटोमेट्री पद्धति है जिसमें प्रतिदीप्ति के साथ चिह्नित कोशिकाओं को विभिन्न प्रकार के रंग के आधार पर विभिन्न परीक्षण ट्यूबों में वितरित किया जाता है। यह प्रक्रिया इम्यूनोलॉजी, हेमेटोलॉजी और संक्रामक रोगों में महत्वपूर्ण है।
इम्यूनोफ्लोरेसेंस इम्यूनोसेज़ पर्यावरण के विषाक्त पदार्थों, आनुवंशिक रूप से संशोधित जीवों और भोजन में कुछ योजक के प्रत्यक्ष पता लगाने की अनुमति देते हैं। इस प्रयोगात्मक सेटअप में हमेशा एक ठोस और एक तरल चरण होता है। एड्स का कारण बनने वाले एचआईवी वायरस सहित कई रोगजनकों का सीधे पता लगाया जा सकता है। जब संक्रामक और ऑटोइम्यून बीमारियों का पता लगाया जाता है, हालांकि, अक्सर एंटीजन के बजाय एंटीबॉडी का पता लगाने की बात होती है। ये शरीर की प्रतिरक्षा प्रणाली द्वारा गठित रक्षा अणु हैं। यहां प्रस्तुत परिभाषा के अनुसार, इस तरह के प्रमाण तब प्रत्यक्ष प्रमाण नहीं होते हैं, क्योंकि फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी सीधे शरीर के स्वयं के एंटीजन से नहीं, बल्कि परीक्षण व्यवस्था के एंटीजन से जोड़े जाते हैं।
प्रयोगात्मक सेट-अप में ये एंटीजन शरीर के स्वयं के एंटीबॉडी से जुड़े होते हैं। सामान्य संक्रमणों के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रत्यक्ष पहचान, उदाहरण के लिए एचआईवी वायरस और क्लैमाइडिया, केवल विशेष पहचान और पुष्टि परीक्षणों में उपयोग किया जाता है। कई और बीमारियों के लिए परीक्षण हैं। ज्यादातर स्थितियों में, एंटीबॉडी का अप्रत्यक्ष पता संक्रामक रोगों के लिए अधिक उपयुक्त है, क्योंकि शरीर की अपनी प्रतिरक्षा प्रणाली में पिछले संक्रमणों को याद रखने की एक सरल क्षमता है। अन्य स्थितियों में, एंटीजन का प्रत्यक्ष पता लगाना और एंटीबॉडी का अप्रत्यक्ष पता लगाना एक दूसरे के पूरक हैं। उत्तरार्द्ध बताते हैं कि एक संक्रमण पहले हुआ है, जबकि पूर्व रोगज़नक़ की गतिविधि की वर्तमान स्थिति के बारे में अधिक सटीक जानकारी प्रदान करता है।
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प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस का पता लगाने के साथ, सभी चिकित्सा साक्ष्य के साथ, दो जोखिम हैं: एक गलत, सकारात्मक परिणाम का जोखिम और एक गलत, नकारात्मक परिणाम का जोखिम। गलत, सकारात्मक परिणाम रोगी के लिए मनोवैज्ञानिक परेशानी और महान तनाव का कारण बनते हैं।
इसलिए, सकारात्मक परिणामों में अतिरिक्त परीक्षण प्रक्रियाएं जोड़ी जाती हैं, खासकर यदि निदान में कठोर जीवन परिवर्तन होता है। झूठे, नकारात्मक परिणाम का जोखिम यह है कि रोगी अपने स्वयं के स्वास्थ्य के लिए खतरे के बारे में नहीं जानता है और शायद अच्छे समय में सार्वजनिक स्वास्थ्य के लिए भी। इसलिए, बहुत अधिक शोध करना और बिक्री के लिए तैयार विभिन्न इम्यूनोफ्लोरेसेंस डायरेक्ट डिटेक्ट्स की एक बड़ी संख्या को बनाना और पेश करना अच्छा है। बीमारियों और विकृति विज्ञान के लिए अन्य प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष पहचान विधियों के साथ मिलकर, यह निदान की सटीकता को बढ़ाता है।
प्रत्यक्ष पहचान एंटीबॉडी संयुग्म पर आधारित है, जो एक तरफ एंटीजन के एपिटोप को बांधता है और दूसरी तरफ भी प्रतिदीप्ति का कारण बनता है। ऐसा उत्पाद इसलिए केवल एक प्रकार की परीक्षण प्रक्रिया में उपयोग किया जाता है और अन्य प्रकार की परीक्षण प्रक्रिया के लिए उपयोग नहीं किया जाता है।यह अप्रत्यक्ष साक्ष्य के लिए एक महत्वपूर्ण प्रक्रियात्मक अंतर है, जिसमें एपिथोप बाइंडिंग के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी द्वारा फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी का इस्तेमाल किया जाता है। एंटीबॉडी संयुग्म इसलिए विभिन्न परीक्षणों के लिए उपयुक्त है। यह प्रक्रियात्मक अंतर एंटीबॉडी के अप्रत्यक्ष पता लगाने और एंटीजन के प्रत्यक्ष पता लगाने के बीच चिकित्सा अंतर से अलग है।
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